ดิ อะเมซิ่ง สไปเดอร์แมน 2 เป็นเรื่องราวของ ปีเตอร์ ปาร์คเกอร์ ที่ค้นพบตัวเองว่า เขารู้สึกสนุก และมีความสุขกับการได้กระโดดไปตามตึกระฟ้าต่าง ๆ ในฐานะ สไปเดอร์แมน ที่ได้รับการยอมรับว่าเป็นฮีโร่ และได้ใช้เวลากับ เกวน สเตซี่ หญิงสาวที่เขารัก แต่แน่นอนว่าการเป็นสไปเดอร์แมนนั้น มีราคาที่ต้องจ่าย เพราะมีเพียงสไปเดอร์แมนเท่านั้น ที่สามารถช่วยปกป้องชาวนิวยอร์กจากเหล่าร้าย ซึ่งภาคนี้ ปีเตอร์ จะต้องฝ่าฟันกับอันตรายอีกครั้ง กับ อีเล็คโตร วายร้ายคนใหม่ ที่ทำให้ปีเตอร์ต้องทุ่มเทชีวิต เผชิญหน้ากับศัตรูที่มีพละกำลังมากกว่าหลายเท่า จนกระทั่งเพื่อนเก่าของปีเตอร์อย่าง แฮร์รี่ ออสบอร์น กลับมาที่นิวยอร์ก จึงทำให้ปีเตอร์เริ่มรู้ว่า ศัตรูของเขาทุกคนล้วนมีสิ่งหนึ่งที่เหมือนกัน นั่นคือมีความเกี่ยวข้องกับ ออสคอร์ป ที่เต็มไปด้วยความลับมากมาย